Microscopie électronique à transmission (MET) ↓
La microscopie électronique à transmission permet, au terme de préparations adaptées d'accéder à de nombreux services :
- Observation classique en mode haut contraste et haute résolution
- Préparation d’échantillons pour l’observation ultrastructurale
- Observation de nano objets par coloration négative
- Localisation d’antigènes avant ou après inclusion en résine et sur cryo-coupes.
L'équipement d'observation Microscope Electronique à Transmission - a compléter
- Modes d'observation :
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- Détecteurs :
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- Equipements supplémentaires :
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Les techniques & équipements de préparation
Observation en mode haut vide d'échantillons secs
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Pour les échantillons hydratés il faut procéder au préalable à leur dessiccation par la technique du point critique. Ci-contre : Tête d'une mouche |
Observation en mode haut vide d'échantillons congelés, utilisation du module de cryo-préparation
La métallisation est obligatoire
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Cryo-planning réalisé avec le cryo-ultramicrotome |
Cryo-fixation dans l'azote pâteux |
Cryofracture
Elle est effectuée soit après cryofixation dans l'azote pateux soit, uniquement pour le Leica HPM 100, à la suite d'une cryo-fixation haute pression:
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Observation en mode à pression contrôlée "low vacuum" d'échantillons secs non conducteurs
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Les échantillons ne sont pas métallisés. L'introduction dans la chambre d'un gaz (air) permet de neutraliser les électrons accumulés à la surface de l'échantillon non conducteur. Ci-contre : Intérieur d'un organogel poreux obtenu à partir d'un gabarit sucre glace, de l'huile de soja et de l'acide 12-hydroxystéarique comme gélifiant. S.Franceschi, E.Perez - Equipe SMODD - Laboratoire IMRCP - Université Paul Sabatier |
Observation en mode environnemental (ESEM)
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Observation sans aucune préparation préalable d'échantillons hydratés. L'échantillon est maintenu hydraté dans la chambre du microscope durant l'observation. Pour cela nous utilisons un vide peu poussé dans la chambre (environ 700 Pascal), une température failble (environ 2°C) et 98 % de vapeur d'eau. L'observation se fait cependant avec une forte perte de résolution par rapport aux deux autres modes. Ci-contre : Diatomées |
Analyse X
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L’analyse élémentaire des échantillons peut être effectuée en mode haut vide et en mode à pression contrôlée. Ci-contre : exemple d'analyse élémentaire avec localisation |
Les équipements
Appareil à point critique Leica EM CPD 300
Automate utilisé pour la dessiccation des échantillons hydratés qui sont préalablement déshydratés par des bains croissants d’alcool jusqu’à l’alcool absolu. Ce dernier est remplacé dans la chambre de l’appareil à point critique par du CO2 liquide. L’augmentation de la température et de la pression à l’intérieur de la chambre (T=35°C, P=79bar) permet de réaliser le contournement du point critique du CO2 (T=31°C, P=73,8bar). Il s’agit de réaliser la dessiccation de l’échantillon en passant de l’état liquide à l’état gazeux par le biais d’une condition intermédiaire, appelée fluide supercritique, dans laquelle la tension superficielle est nulle, ainsi l’échantillon ne subira pas de rétraction.
Cryo-ultramicrotome Leica EM FC7 avec adaptateur cryo Leica EM FC7
Cryo-ultramicrotome permettant de polir, à très basse température, la surface des échantillons congelés pour une observation en cryo MEB.
Metalliseur Leica EM MED 020
Ce métalliseur permet de recouvrir les échantillons d’une couche de platine (1 à 10nm). Cette étape augmente la conductivité des échantillons et le rendement en électrons secondaires produit par le faisceau d’électrons primaires du MEB. La métallisation apporte un meilleur contraste à l’image et évite les effets de charge dû à l’accumulation des électrons à la surface de l’échantillon.
Armoires de conservation des échantillons
Ces armoires contiennent du gel de silice avec indicateur de saturation qui capte l’humidité et maintient ainsi les échantillons dans leur état dessiqué.
Module de Cryopréparation Qurom PP3000T
Ce module directement fixé sur le microscope électronique à balayage est contrôlé par un logiciel, il nous permet de réaliser :
- le maintien de l’échantillon à très basse température (-140°C)
- le transfert de l’échantillon vers la platine cryogénisée du microscope électronique
- la sublimation de la glace (en principe à -95°C)
- la métallisation de l’échantillon au platine